電(dian)熱恒(heng)溫水浴鍋(guo)與細胞(bao)復蘇：微觀世界(jie)的(de)溫度(du)魔(mo)法

摘(zhai)要(yao)

本(ben)文(wen)詳細闡(chan)述了利(li)用電熱恒(heng)溫水浴鍋(guo)進(jin)行(xing)細胞(bao)復蘇的原理、操作步驟。細胞(bao)復蘇是細胞(bao)培養(yang)過程(cheng)中的關鍵環節，電熱恒(heng)溫水浴鍋(guo)憑借其能快速(su)、穩定(ding)升(sheng)溫的特性，為細胞(bao)復蘇提(ti)供了適宜的溫度(du)環境，對(dui)維(wei)持細胞(bao)活性(xing)和功(gong)能(neng)至關重要(yao)。通(tong)過規(gui)範操作和妥(tuo)善(shan)處(chu)理常(chang)見問(wen)題，可有效提(ti)高細胞(bao)復蘇成功(gong)率，為後續(xu)細胞(bao)實驗(yan)奠定(ding)良好(hao)基(ji)礎。

壹、引(yin)言(yan)

細胞(bao)培養(yang)技(ji)術廣(guang)泛應(ying)用於生(sheng)物學(xue)、醫(yi)學(xue)等眾(zhong)多領(ling)域(yu)，如藥(yao)物研(yan)發、疾(ji)病(bing)模型構建(jian)、細胞(bao)治療(liao)等。在細胞(bao)培養(yang)過程(cheng)中，細胞(bao)復蘇是將凍存的細胞(bao)恢復到(dao)活性(xing)狀態，使(shi)其(qi)能(neng)夠(gou)繼(ji)續(xu)生(sheng)長(chang)和繁殖(zhi)的(de)重(zhong)要步驟。電熱恒(heng)溫水浴鍋(guo)以(yi)其(qi)均(jun)勻、穩定(ding)且(qie)能(neng)快速(su)達(da)到(dao)特定(ding)溫度(du)的(de)特點(dian)，成為細胞(bao)復蘇過程(cheng)中的設(she)備。

二(er)、電熱恒(heng)溫水浴鍋(guo)用於細胞(bao)復蘇的原理

細胞(bao)在凍存過程(cheng)中，為避免(mian)冰晶(jing)形(xing)成對(dui)細胞(bao)造成損(sun)傷，通(tong)常(chang)采用添(tian)加冷凍保(bao)護(hu)劑(ji)（如二(er)甲基(ji)亞碸(feng)，DMSO）並緩(huan)慢(man)降(jiang)溫的方式(shi)，使(shi)細胞(bao)進(jin)入(ru)休(xiu)眠(mian)狀態。而(er)細胞(bao)復蘇的關鍵在於快速(su)解(jie)凍，防(fang)止(zhi)在解凍過程(cheng)中因冰(bing)晶(jing)重結晶(jing)而(er)再次(ci)損(sun)傷細胞(bao)。電熱恒(heng)溫水浴鍋(guo)能夠(gou)提(ti)供壹個溫度(du)均(jun)勻且可(ke)精確(que)控(kong)制(zhi)的(de)水環境，壹(yi)般將溫度(du)設(she)定(ding)在 37℃左右，該溫度(du)接近(jin)人(ren)體體(ti)溫，是大多數細胞(bao)生長(chang)的適宜溫度(du)。當裝(zhuang)有凍存細胞(bao)的凍存管(guan)置於(yu)水浴鍋(guo)中時，水浴鍋(guo)的熱量迅速(su)傳(chuan)遞給凍存管(guan)，使管(guan)內的(de)細胞(bao)懸液(ye)快速(su)升(sheng)溫解凍，從(cong)而(er)減少(shao)冰(bing)晶(jing)對(dui)細胞(bao)的損(sun)傷，恢復細胞(bao)的活(huo)性。

三、利用電熱恒(heng)溫水浴鍋(guo)進(jin)行(xing)細胞(bao)復蘇的操作步驟

準備工(gong)作

檢查(zha)電(dian)熱恒(heng)溫水浴鍋(guo)的水位，確(que)保(bao)水位在合適範圍(wei)內，避免(mian)幹燒(shao)。同(tong)時(shi)，檢查(zha)水浴鍋(guo)的溫度(du)顯示是(shi)否正(zheng)常(chang)，將溫度(du)設(she)定(ding)為 37℃， 預熱 15 - 20 分鐘，使水溫達到(dao)並穩定(ding)在 37℃。

準備好(hao)含(han) 10% - 20%胎牛(niu)血(xue)清(qing)（FBS）的培養(yang)基(ji)、無菌離(li)心(xin)管(guan)、移液(ye)器、槍(qiang)頭(tou)、鑷(nie)子等實(shi)驗器材，並(bing)進(jin)行(xing)嚴格的消(xiao)毒處(chu)理。

從(cong)液(ye)氮(dan)罐(guan)中(zhong)取(qu)出凍存的細胞(bao)管(guan)，記錄(lu)細胞(bao)的名(ming)稱、凍存時間(jian)等信(xin)息(xi)。註(zhu)意在取細胞(bao)管(guan)時要(yao)佩戴(dai)防護(hu)手套和護(hu)目鏡，防止(zhi)液(ye)氮(dan)凍傷。

細胞(bao)解凍

迅速將取出(chu)的凍存細胞(bao)管(guan)放入(ru)預熱好的電(dian)熱恒(heng)溫水浴鍋(guo)中，並用鑷(nie)子夾(jia)住輕輕晃動，使其(qi)受熱均勻。註(zhu)意凍存管(guan)的蓋子不要(yao)浸入(ru)水中，以(yi)免(mian)汙(wu)染(ran)。

在 1 - 2 分鐘內觀(guan)察(cha)細胞(bao)懸液(ye)的(de)狀態，當凍存管(guan)內的(de)細胞(bao)懸液(ye)基(ji)本(ben)融化，僅(jin)殘留少(shao)許冰(bing)碴(cha)時(shi)，立(li)即(ji)從水浴鍋(guo)中取出凍存管(guan)。

細胞(bao)轉(zhuan)移(yi)與離心(xin)

用 75%酒精(jing)擦拭(shi)凍存管(guan)表(biao)面(mian)進(jin)行(xing)消(xiao)毒後(hou)，在超凈(jing)工(gong)作臺內(nei)將(jiang)細胞(bao)懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至含有適量培養(yang)基(ji)的無菌離(li)心(xin)管(guan)中。壹(yi)般按照(zhao) 1:10 - 1:20 的(de)比例將細胞(bao)懸液(ye)加(jia)入(ru)到(dao)培養(yang)基(ji)中，以(yi)稀(xi)釋冷凍保(bao)護(hu)劑(ji)的濃(nong)度(du)，減(jian)輕其對(dui)細胞(bao)的毒性(xing)。

將離心(xin)管(guan)放入(ru)離(li)心(xin)機中(zhong)，設(she)置(zhi)轉(zhuan)速(su)為 1000 - 1500 rpm，離心(xin) 5 - 8 分鐘，使細胞(bao)沈澱在離心(xin)管(guan)底部(bu)。

細胞(bao)重懸(xuan)與接種(zhong)

小心(xin)吸(xi)出(chu)離(li)心(xin)管(guan)上層的清液(ye)，註(zhu)意不(bu)要吸到(dao)細胞(bao)沈澱。然(ran)後加(jia)入(ru)適量新鮮(xian)的(de)培養(yang)基(ji)，用移液(ye)器輕輕吹打(da)細胞(bao)沈澱，使(shi)其充(chong)分重(zhong)懸(xuan)，制成均(jun)勻的細胞(bao)懸液(ye)。

將細胞(bao)懸液(ye)接種(zhong)到(dao)預先(xian)準備好(hao)的(de)培養(yang)瓶(ping)或培養(yang)板(ban)中(zhong)，輕輕搖勻，使細胞(bao)均勻分布(bu)。將培養(yang)瓶(ping)或培養(yang)板(ban)放(fang)入(ru) 37℃、5% CO₂ 的(de)細胞(bao)培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。

四(si)、結論

電熱恒(heng)溫水浴鍋(guo)在細胞(bao)復蘇過程(cheng)中起著至關重要(yao)的作用，其精(jing)確的(de)溫度(du)控(kong)制和快速(su)的(de)升(sheng)溫特性為細胞(bao)復蘇提(ti)供了必(bi)要(yao)條件(jian)。通(tong)過嚴(yan)格遵循(xun)操作步驟、註(zhu)意操作過程(cheng)中的各項(xiang)要(yao)點(dian)，並(bing)及(ji)時解(jie)決可(ke)能出現(xian)的問(wen)題，能夠(gou)有效提(ti)高細胞(bao)復蘇的成功(gong)率，保(bao)證細胞(bao)的活(huo)性和功(gong)能(neng)，為後續(xu)的(de)細胞(bao)培養(yang)實(shi)驗(yan)以(yi)及(ji)相(xiang)關研究(jiu)工(gong)作奠定(ding)堅實(shi)的(de)基(ji)礎。隨著細胞(bao)培養(yang)技(ji)術的不斷發展(zhan)，對(dui)電熱恒(heng)溫水浴鍋(guo)等設備的性能(neng)和操作要求(qiu)也(ye)將不斷(duan)提(ti)高，需要科研(yan)人(ren)員(yuan)持(chi)續(xu)關註(zhu)和探(tan)索，以(yi)更好地(di)滿(man)足(zu)細胞(bao)復蘇及(ji)相(xiang)關實驗(yan)的需求。