細胞傳代(dai)培(pei)養(yang)實驗

       體(ti)外(wai)培(pei)養(yang)的原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)或(huo)細(xi)胞(bao)株(zhu)要(yao)在體(ti)外(wai)持續(xu)地培(pei)養(yang)就(jiu)必須傳(chuan)代(dai)，以(yi)便獲得穩定的細胞株(zhu)或(huo)得到(dao)大(da)量(liang)的同(tong)種(zhong)細(xi)胞，並維(wei)持細(xi)胞種(zhong)的(de)延(yan)續(xu)。二(er)氧(yang)化碳培(pei)養(yang)箱(xiang)是(shi)通(tong)過(guo)在培(pei)養(yang)箱(xiang)箱(xiang)體(ti)內模(mo)擬形(xing)成(cheng)壹(yi)個類(lei)似細(xi)胞(bao)/組織在生(sheng)物(wu)體(ti)內的生(sheng)長(chang)環(huan)境(jing)，培(pei)養(yang)箱(xiang)要(yao)求穩定的溫(wen)度（37°C）、穩定的CO2水(shui)平(ping)（5%）、恒定的酸(suan)堿度（pH值：7.2-7.4）、較(jiao)高的相(xiang)對(dui)飽(bao)和(he)濕(shi)度(du)（95%），來(lai)對(dui)細(xi)胞/組織進(jin)行體(ti)外(wai)培(pei)養(yang)的壹(yi)種(zhong)裝(zhuang)置(zhi)，是(shi)細胞、組織、細(xi)菌培(pei)養(yang)的壹(yi)種(zhong)先(xian)進(jin)儀器(qi)，是開展(zhan)免(mian)疫學(xue)、腫瘤(liu)學(xue)、遺傳(chuan)學(xue)及(ji)生(sheng)物(wu)工(gong)程所(suo)必須的(de)關鍵設備(bei)。

      培(pei)養(yang)的細(xi)胞(bao)形(xing)成(cheng)單(dan)層(ceng)匯合以(yi)後，由於密(mi)度過(guo)大(da)生存空(kong)間(jian)不足(zu)而引(yin)起(qi)營養(yang)枯竭，將(jiang)培(pei)養(yang)的細(xi)胞(bao)分散，從容(rong)器中(zhong)取(qu)出(chu)，以(yi)１:２或(huo)１:３以(yi)上(shang)的(de)比(bi)率(lv)轉(zhuan)移(yi)到(dao)另外(wai)的容(rong)器中(zhong)進行培(pei)養(yang)，即為(wei)傳代(dai)培(pei)養(yang)；細胞(bao)“壹(yi)代(dai)”指(zhi)從細胞接種到(dao)分離再(zai)培(pei)養(yang)的壹(yi)段期(qi)間(jian)，與細(xi)胞世(shi)代(dai)或(huo)倍(bei)增(zeng)不(bu)同(tong)。

      在壹(yi)代(dai)中(zhong)，細胞培(pei)增３～６次(ci)。細胞(bao)傳代(dai)後(hou)，壹(yi)般經(jing)過三(san)個階(jie)段：遊(you)離期(qi)、指(zhi)數增生(sheng)期(qi)和停(ting)止(zhi)期。常(chang)用(yong)細胞(bao)分裂指(zhi)數表示(shi)細(xi)胞增(zeng)殖(zhi)的旺(wang)盛程度，即(ji)細(xi)胞群(qun)的分裂相(xiang)數/１００個細(xi)胞(bao)。壹(yi)般細(xi)胞(bao)分裂指(zhi)數介(jie)於(yu)０.２％～０.５％，腫瘤細胞(bao)可(ke)達(da)３～５％；細胞(bao)接種２～３天分裂增(zeng)殖(zhi)旺(wang)盛，是(shi)活力(li)Zui好時期(qi)，稱指(zhi)數增生(sheng)期(qi)(對數生長(chang)期)，適宜進行(xing)各(ge)種(zhong)試驗。

      實驗步驟：

     １.將(jiang)長(chang)成(cheng)的(de)培(pei)養(yang)細胞(bao)從(cong)二(er)氧(yang)化碳培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)取(qu)出(chu)，在超(chao)凈工(gong)作臺(tai)中(zhong)倒掉瓶(ping)內的培(pei)養(yang)液，加入少許(xu)消化液。(以(yi)液面(mian)蓋(gai)住(zhu)細(xi)胞為(wei)宜)，靜置(zhi)５～１０分鐘。

     ２.在倒置(zhi)鏡下觀(guan)察被消化的細(xi)胞(bao)，如(ru)果細胞(bao)變圓(yuan)，相(xiang)互(hu)之(zhi)間(jian)不再(zai)連接成(cheng)片，這(zhe)時(shi)應立(li)即(ji)在超(chao)凈臺(tai)中(zhong)將(jiang)消化液倒掉，加(jia)入３～５ml新鮮(xian)培(pei)養(yang)液，吹打，制成(cheng)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液。

     ３.將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液吸出(chu)２ml左右，加(jia)到(dao)另壹(yi)個培(pei)養(yang)瓶中(zhong)並向每個瓶(ping)中(zhong)分別加(jia)３ml左右培(pei)養(yang)液，蓋好瓶塞，送(song)回二(er)氧(yang)化碳培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)，繼續(xu)進行(xing)培(pei)養(yang)。壹(yi)般情(qing)況(kuang)，傳代(dai)後(hou)的(de)細(xi)胞(bao)在２小時(shi)左(zuo)右就(jiu)能附著在培(pei)養(yang)瓶壁(bi)上(shang)，２～４天(tian)就(jiu)可在瓶(ping)內形成(cheng)單(dan)層(ceng)，需要(yao)再(zai)次進(jin)行傳(chuan)代(dai)。

      如(ru)需(xu)了解(jie)更(geng)多二(er)氧(yang)化碳培(pei)養(yang)箱(xiang)相(xiang)關的知(zhi)識，歡(huan)迎(ying)聯系(xi)上(shang)海(hai)喆圖科學(xue)儀器(qi)有(you)限(xian)公(gong)司。