糖化酶的(de)制備

  糖(tang)化酶(mei)又稱(cheng)葡萄糖(tang)澱粉酶(mei)，其作(zuo)用方(fang)式不(bu)像(xiang)α-澱粉酶(mei)那樣(yang)無(wu)作(zuo)用次序,而是從底(di)物(wu)鏈(lian)的(de)非(fei)還原(yuan)性(xing)末端(duan)開(kai)始,順(shun)次(ci)切(qie)下(xia)壹個(ge)個(ge)葡(pu)萄(tao)糖單位(wei),遇到(dao)分支處的α-1,6糖苷(gan)鍵(jian)時,可(ke)將α-1,6糖苷鍵切(qie)開(kai),然後(hou)繼(ji)續作(zuo)用α-1,4糖苷鍵,直(zhi)到產(chan)物全(quan)部(bu)成為葡萄糖(tang)為止(zhi)。但糖化(hua)酶對α-1,6糖(tang)苷(gan)鍵的(de)作(zuo)用速度遠不(bu)及(ji)對α-1,4糖(tang)苷(gan)鍵的(de)作(zuo)用速度，因(yin)此水(shui)解(jie)支鏈(lian)澱粉多(duo)的澱粉時，需(xu)延(yan)長(chang)水(shui)解(jie)作(zuo)用時間(jian)或(huo)添加部(bu)分支鏈(lian)澱粉酶(mei)。
  我(wo)國(guo)糖(tang)化(hua)酶(mei)的生產(chan)主要(yao)由黑曲(qu)黴優良(liang)菌種經深層發酵精制提煉(lian)而成。本實(shi)驗利(li)用黑曲黴具(ju)有(you)多種(zhong)活(huo)力(li)較(jiao)強酶(mei)系(xi)的特點，利(li)用澱粉類(lei)物質為原(yuan)料(liao)，獲(huo)得制備澱粉水(shui)解糖(tang)所需(xu)的(de)糖化(hua)酶。

壹、實(shi)驗材料

1. 菌種：黑曲黴(mei)（Aspergillus niger）

2. 儀(yi)器：潔凈(jing)工(gong)作(zuo)臺(tai)、滅菌鍋、恒(heng)溫培(pei)養箱、高(gao)速冷凍離心(xin)機、高壓(ya)滅菌鍋

二、實(shi)驗步驟(zhou)

實(shi)驗流(liu)程(cheng)：保(bao)藏(zang)菌種®菌株(zhu)活(huo)化(hua)及(ji)平板(ban)擴(kuo)大(da)培(pei)養®搖(yao)瓶培養

1.菌株(zhu)活(huo)化(hua)及(ji)擴(kuo)大(da)培(pei)養

①制備PDA培養基：去(qu)皮馬(ma)鈴(ling)薯(shu)200g切(qie)成小(xiao)塊，加水(shui)約500mL，煮沸30min，然後(hou)用紗(sha)布過濾(lv)，濾(lv)液(ye)加蔗糖20g，瓊脂20g。溶化(hua)後(hou)加水(shui)定(ding)容(rong)至(zhi)1000mL，分裝於(yu)250ml錐(zhui)形(xing)瓶中，121℃滅菌20min，自然pH。

②接種(zhong)：取(qu)滅(mie)菌後(hou)PDA培(pei)養基倒平(ping)板(ban)，冷(leng)卻(que)後(hou)，接(jie)種(zhong)斜(xie)面(mian)保(bao)藏(zang)的黑(hei)曲(qu)黴(mei)菌種，28℃恒(heng)溫培(pei)養3d。

2.搖(yao)瓶發酵培養

①發酵(jiao)培養基的(de)制備：

玉米(mi)粉(fen)培(pei)養基：玉(yu)米(mi)粉(fen)30g,米(mi)糠(kang)5g,麩(fu)皮5g,加水(shui)1000ml,拌(ban)勻(yun)至(zhi)無(wu)幹(gan)粉(fen)又無(wu)結團(tuan)，分裝於(yu)250 ml錐(zhui)形(xing)瓶內，每瓶100ml, 自然pH，121℃滅菌20 min。

②接種與產(chan)酶培(pei)養:取培(pei)養72h的黑(hei)曲黴平板，用打孔器打孔制成菌片。每個錐(zhui)形(xing)瓶中接種12片(pian)，放(fang)在(zai)恒(heng)溫培(pei)養箱中(zhong)28℃培養96 h。

3.離心(xin)

將搖(yao)床(chuang)培養4d的黑(hei)曲黴發酵液4層紗(sha)布過濾(lv)後(hou)離心(xin)（10000r/min，10min）除菌體，所得上清(qing)液即為糖化酶(mei)粗酶液。